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1. chinaXiv:201812.00148 [pdf]

家蝇抗菌肽AMPs17蛋白原核表达条件的优化及其抗真菌活性检测

杨隆兵; 国果; 马慧玲; 李妍; 赵欣宇; 苏佩佩; 张勇
Subjects: Biology >> Bioengineering

目的:优化AMPs17重组蛋白的原核表达条件,分析重组蛋白的抗真菌活性。方法:比较不同的诱导温度(25 ° C, 28 ° C, 30 ° C, 32 ° C, 34 ° C)、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度(0.025、 0.05、0.1、0.3、0.5、0.8、1.0mmol·L-1)和诱导时间(12h、15h、18h、21h、24h)对AMPs17重组蛋白表达量的影响,筛选AMPs17重组蛋白的最佳表达条件;采用镍离子金属螯合剂亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE电泳和ImageJ图像分析系统对表达结果进行分析,Western bolt对AMPs17重组蛋白鉴定,高效液相色谱分析重组蛋白的纯度,微量液体稀释法及菌落计数法检测其抗真菌活性。结果:在诱导温度为32℃、IPTG浓度为0.05mmol·L-1的条件下诱导培养15h,AMPs17重组蛋白的表达量最高且最为稳定;HPLC色谱仪分析显示AMPs17重组蛋白纯度可达到90%以上;优化后的AMPs17重组蛋白能有效抑制白色念珠菌的生长。结论:本研究优化了家蝇抗菌肽AMPs17的诱导表达条件,获得了高表达、稳定且具有抗真菌活性的蛋白,为后续抗菌机制及应用研究提供一定的实验基础。

submitted time 2018-12-16 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits1782Downloads563 Comment 0

2. chinaXiv:201804.01782 [pdf]

利用SpyTag/SpyCatcher构建胞内自组装多酶复合体实现高效生物合成

刘璐; 殷亮; 黄飞; 张勇; 刘倩; 冯雁
Subjects: Biology >> Bioengineering

SpyCatcher和SpyTag可通过自发反应形成共价键,产生稳定的分子自组装体。酶分子自组装体因具有高效有序的催化特性在合成生物学和纳米技术领域具有重要的应用价值。为探索SpyTag/SpyCatcher在大肠杆菌胞内多酶复合体系形成有序自组装分子能力,将SpyCatcher和SpyTag分别与P450BM3m单加氧酶和葡萄糖脱氢酶GDH进行融合表达,以期产生具有辅酶再生循环系统、高效生物合成靛蓝分子的SpyTag/SpyCatcher双酶自组装复合体。首先,通过电泳及质谱对重组工程菌表达蛋白进行分析,证实SpyCatcher-P450BM3m与SpyTag-GDH在胞内成功形成了自组装多酶复合体;然后,系统分析了不同培养条件下组装体合成靛蓝的能力,结果发现,经0.5mmol/L IPTG诱导后,菌体在16 ℃继续培养18 h后,工程菌对吲哚(2 mmol/L)与葡萄糖(4 mmol/L)的全细胞催化能力最强,靛蓝产量最高达258 mg/L,是未组装多酶系统的1.9倍,比P450BM3m单酶表达系统高约2.4倍;反应70 min后达到反应平衡,转化率为52%。本研究成功实现了SpyTag/SpyCatcher介导的多酶体系在大肠杆菌细胞中的自组装和高效转化体系,为胞内多酶复合物组装体的设计提供了新思路。

submitted time 2018-04-19 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits1946Downloads970 Comment 0

3. chinaXiv:201712.01498 [pdf]

海岸线与海岸景观格局对人为干扰度的动态响应——以营口市南部海岸为例

刘富强,吴涛,蒋国俊,XuelianMeng,童丽颖,张勇,索安宁,朱丽东
Subjects: Biology >> Ecology

利用多期遥感数据,提取营口南部海岸五期岸线变化信息、分维值,并利用Arcgis10.2中渔网工具创建评价单元。计算景观格局指数,构建人为干扰强度指标,并进一步探讨岸线变化和景观格局变化对人类活动的动态响应。结果表明:(1)研究区围垦导致岸线长度增长、岸线分形维数的增大,1990-2015年四个时段中岸线年增长速率为0.52%、0.53%、4.98%和0.96%;(2)景观格局指数反映2005年之前景观边界、形状复杂程度与破碎程度有所增加;2005年之后景观形状趋于规则化、土地利用趋于均衡化;(3)研究期间强干扰和弱干扰区域面积均有所增加,中等干扰强度区域面积减小;(4)斑块密度、总边缘长度、边缘密度、景观形状指数和平均分维值均与平均干扰强度指数变化同步。Shannon多样性指数与人为干扰强度变化呈反相关;(5)岸线长度变化和岸线分形维数变化都与人类干扰度呈反相关,相关性分别为-0.97和-0.98。

submitted time 2017-12-02 From cooperative journals:《生态学报》 Hits642Downloads366 Comment 0

4. chinaXiv:201711.02100 [pdf]

玉米赤霉烯酮对母猪繁殖性能和胎盘免疫相关基因表达量的影响

王相生; 孙亚宁; 阮崇美; 张全伟; 张 勇; 胡骁飞
Subjects: Biology >> Zoology

本试验旨在研究饲粮中添加玉米赤霉烯酮(ZEN)对母猪繁殖性能和胎盘免疫相关基因表达量的影响。选择胎次相近、体重200 kg、妊娠第30天的长×大二元杂交母猪40头,随机分为2组,每组20个重复,每个重复1头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲粮在基础饲粮中添加1.5 mg/kg的ZEN。试验期74 d。结果表明,与对照组相比:1)饲粮中添加ZEN显著提高了妊娠期母猪死胎数和弱仔猪数(P<0.05),显著降低了母猪总产仔数(P<0.05);2)饲粮中添加ZEN显著提高了妊娠期母猪血清孕酮含量(P<0.05);3)饲粮中添加ZEN显著提高了妊娠期母猪胎盘中Toll样受体-2(TLR-2)和孕酮受体(PGR)基因表达量(P<0.05)。由此可见,母猪妊娠期饲粮中添加1.5 mg/kg ZEN可显著降低母猪总产仔数,并显著提高死胎数和弱仔猪数。饲粮中低水平的ZEN对母猪繁殖性能仍产生不利影响。

submitted time 2017-11-08 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits2381Downloads727 Comment 0

5. chinaXiv:201711.01740 [pdf]

玉米赤霉烯酮降解酶在枯草芽孢杆菌中的表达及其对母猪繁殖性能的影响

王相生; 孙亚宁阮崇美; 张全伟张 勇[1]; 胡骁飞
Subjects: Biology >> Zoology

试验旨在建立玉米赤霉烯酮(ZEN)降解酶基因ZEN-jjm在枯草芽孢杆菌中的表达体系,确定其产物的生物降解活性及对母猪繁殖性能的作用。克隆ZEN-jjm基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后连接至pHT01表达载体中,构建重组质粒;转化枯草芽孢杆菌,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析ZEN-jjm蛋白表达水平。高效液相色谱法(HPLC)检测表达的ZEN-jjm蛋白降解ZEN的活性。通过对母猪的繁殖性能的评价,确定ZEN降解酶降解ZEN对母猪繁殖性能的影响。双酶切和测序结果表明:ZEN-jjm成功插入pHT01中,SDS-PAGE表明获得1株高效表达目的蛋白的重组枯草芽孢杆菌,其大小约为29 ku。HPLC结果表明表达的ZEN-jjm蛋白能有效地降解ZEN;表达的ZEN-jjm蛋白能显著缓解ZEN对繁殖母猪的毒害作用(P<0.05)。综上:1)本研究成功构建了表达ZEN-jjm在枯草芽孢杆菌中的表达载体,并在枯草芽孢杆菌中得到了表达。2)表达的ZEN-jjm蛋白具有降解ZEN的生物活性。3)在饲粮中添加ZEN-jjm蛋白能显著降低ZEN对母猪能繁殖性能的危害。

submitted time 2017-11-08 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits599Downloads363 Comment 0

6. chinaXiv:201711.01501 [pdf]

苦味受体的生物学特征、信号转导机制及苦味剂和苦味抑制剂对苦味受体的影响

曹英东; 李方方; 张 勇; 黄铁军
Subjects: Biology >> Zoology

苦味受体(bitter taste receptors,TAS2Rs)是一种G-蛋白偶联受体(GPCR),由30个基因组成的基因家族编码。苦味可使动物远离有毒有害物质,当动物尝到苦味物质时,会刺激舌头的味蕾中味觉受体细胞表达TAS2Rs,进而引发下游一系列信号转导反应,最终通过鼓索神经和舌咽神经将信息整合传到大脑,使动物产生厌恶的感觉,从而选择拒绝摄入这些苦味物质。本文就TAS2Rs的生物学特征、信号转导机制及苦味剂和苦味抑制剂对苦味受体的影响进行简要综述。

submitted time 2017-11-07 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits1020Downloads626 Comment 0

7. chinaXiv:201711.01504 [pdf]

不同复合诱食剂在仔猪教槽料和保育料中配合应用效果研究

李方方; 武思远; 朱宇旌; 黄铁军; 何茂龙; 张 勇
Subjects: Biology >> Zoology

本试验旨在研究香甜鲜复合诱食剂和香甜复合物诱食剂配合使用对仔猪生长性能、血清生化指标、养分表观消化率及粪便微生物数量的影响。选取8窝7日龄的大白仔猪,随机分为2个组,每个组4个重复,2个组分别用基础教槽料(对照组)和添加2 kg/t香甜鲜复合诱食剂的试验教槽料进行教槽训练。21日龄断奶时饲喂3 d粥状料过度(采食量无统计)。然后,分别在2个组中选取28头体重相近、体况良好的24日龄仔猪,每个组4个重复,继续饲喂相应教槽料。仔猪37日龄时更换保育料,对照组仍为基础保育料,试验组在基础保育料基础上添加0.8 kg/t香甜复合诱食剂,直至试验结束。试验期59 d。结果表明:1)经过前期教槽训练,与对照组相比,教槽料中添加香甜鲜复合诱食剂能显著提高断奶仔猪的平均日采食量(P<0.10),显著降低血清中胰高血糖素样肽-1的含量(P<0.10)。2)在保育阶段,与对照组相比,保育料中添加香甜复合诱食剂能显著提高断奶仔猪的平均日采食量和平均日增重(P<0.10)。综合分析,2种复合诱食剂在仔猪教槽料和保育料中配合应用可以提高仔猪的生长性能,对粪便微生物菌群和养分表观消化率没有影响。

submitted time 2017-11-07 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits1133Downloads655 Comment 0

8. chinaXiv:201711.01505 [pdf]

香甜鲜复合诱食剂对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、养分表观消化率和粪便微生物菌群的影响

李方方; 武思远; 朱宇旌; 黄铁军; 何茂龙; 张 勇
Subjects: Biology >> Zoology

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平香甜鲜复合诱食剂对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、养分表观消化率和粪便微生物菌群的影响。选取(43±4)日龄体重相近的健康大白仔猪72头,随机分为3个组,每个组3个重复,每个重复8头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮上添加1和2 kg/t的香甜鲜复合诱食剂。试验期28 d。结果表明:与对照组相比,饲粮中添加2 kg/t香甜鲜复合诱食剂能够显著提高断奶仔猪平均日采食量和平均日增重(P<0.05);饲粮中添加香甜鲜复合诱食剂对养分表观消化率、血清生化指标和粪便微生物菌群的影响不显著(P>0.05)。由此可见,饲粮中添加2 kg/t香甜鲜复合诱食剂能提高断奶仔猪平均日采食量和平均日增重,提高生长性能。本试验条件下推荐断奶仔猪饲粮中添加2 kg/t香甜鲜复合诱食剂为宜。

submitted time 2017-11-07 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits1198Downloads666 Comment 0

9. chinaXiv:201812.00612 [pdf]

肠黏膜上皮组织紧密连接的生物学功能和作用机理[1]

陈 意; 李方方; 张 勇; 黄铁军2()
Subjects: Biology >> Zoology

紧密连接(TJ)是肠黏膜上皮细胞间的主要连接方式,对维持黏膜上皮细胞极性及调节肠屏障的通透性发挥着重要的作用。TJ在黏膜上皮细胞间形成限制溶质和物质运动的细胞屏障。总的来说,TJ的结构可以概括为跨膜屏障蛋白与周围的脚手架蛋白组成的间隔。在这个复杂的网络中有许多相关的信号蛋白,影响屏障和更广泛的细胞功能。本文从TJ在肠黏膜上皮中的生物学功能、分子调控机制及当前研究现状等作综合阐述。

submitted time 2017-11-07 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits706Downloads427 Comment 0

10. chinaXiv:201711.01008 [pdf]

鲜味剂对猪味觉的调控及其机理

刘清梅; 李方方; 张勇; 朱宇旌
Subjects: Biology >> Zoology

动物的采食量在实际生产中起着重要的作用。因仔猪对鲜味的偏爱,所以常在仔猪饲料中添加鲜味剂以提高仔猪的采食量。鲜味剂提高仔猪采食量的主要途径是通过刺激其味觉,从而促进口腔和胃肠道中的激素等分泌,以增加其对饲料的采食。本文从鲜味剂对猪味觉的调控进行阐述,旨在为鲜味剂在仔猪饲料中的应用提供理论依据。

submitted time 2017-10-23 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits1347Downloads762 Comment 0

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